源自活性污泥多源基因體新穎酯酶Est03之蛋白純化與特性分析
- 期別
- 2021-54-4-273-281
- 作者
- 黃子瑄、廖仁寶
- 關鍵字
- 活性污泥多源基因體、新穎酯酶、特性分析
- 摘要
- 本研究目的為針對從活性污泥多源基因體篩選而得的新穎酯酶基因est03 進行次選殖、表現、純化及特性分析，以期供後續研究與應用。est03 基因長762 bp，可轉譯為含253 個胺基酸的酯酶，分子大小約為28.8 kDa，稱為Est03。將新穎酯酶基因est03 次選殖於表現載體pPAL7 上，轉形於表現宿主大腸桿菌(Escherichia coli BL21 (DE3)) 中。轉形株經IPTG 誘導大量表現標的蛋白質後，利用套組純化並切除後成為與原始胺基酸序列相同的純化酵素。經特性分析後發現，Est03 對於短鏈脂肪酸受質有較高喜好度，尤其對二碳受質(C2) 活性顯著高於其他(P < 0.001)，在溫度試驗中顯示它在35 － 50℃具有較佳活性，最適溫度為45℃，比活性為12.15 unit/mg，kcat/Km 為1.58 × 10-3 s-1‧μM-1。Est03 在pH 6.5 至pH 9.0 間，相較於在其他pH 值有較佳活性，且於pH 8.0 時活性最高。同時，Est03 在常用種類與濃度之有機溶劑、金屬離子及介面活性劑環境中皆具有活性。綜而論之，Est03 具有值得關注的生化特性，期能進一步開發應用於生物技術產業。