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- 期別
- 2013-46-1-51-62
- 作者
- 楊鎮榮、廖御靜、陳怡秀、劉仁澤、陳立人、徐怡強
- 關鍵字
- 豬胚幹細胞、無飼養層、體外培養
- 摘要
- 本試驗之目的在探討無飼養層培養系統對豬胚幹細胞體外增生、群落形成效率、未分化狀態維持、細胞毒性、分化多能性與細胞凋亡之影響，期建立穩定的無飼養層體外培養系統做為胚幹細胞培養之用。試驗之豬胚幹細胞培養於小鼠胎源纖維母細胞為飼養層之培養環境，並以胚幹細胞培養液添加 16% 胎牛血清為對照組，ESM 添加 mEF 調節培養液或鹼性纖維母細胞生長因子 1 ng/mL 等不同成分，再以 laminin、collagen IV、fibronectin及 MatrigelR 等飼養層替代性貼附物質，探討無飼養層培養系統對豬胚幹細胞體外培養系統之影響。試驗結果顯示：（1）生長曲線：ESM 添加 16% FBS 之無飼養層培養系統，其生長曲線為對照組之 0.17－0.26 倍；ESM添加 16% FBS 及 mEF CM 之生長曲線為對照組之 1.00－1.85 倍；ESM 添加 16% FBS 及 bFGF 1 ng/mL 者則為對照組之 1.51－1.95 倍。（2）群落形成效率與其維持未分化狀態分析：ESM 添加 16% FBS 為培養液之無飼養層培養系統，於第 6 天時均無法維持豬胚幹細胞之正常群落形態，但添加 16% FBS 與 mEF CM 者可維持 5.6－11.1% 的群落效率；ESM添加 16% FBS 及 bFGF 1 ng/mL 則可維持 5.6－23.5% 的群落效率。（3）LDH 毒性分析：ESM 添加16% FBS 為培養液之無飼養層培養系統，其細胞毒性為對照組之 1.45－1.48 倍；ESM 添加 16% FBS 及mEF CM 的細胞毒性為對照組之 1.38－1.43 倍；ESM 添加 16% FBS 及 bFGF 1 ng/mL 則為對照組之 1.37－1.43 倍。（4）分化多能性分析：以分化多能性標幟之抗體 Oct-4、AP、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60 及 TRA-1-81 進行染色分析，經染色後均具陽性反應，顯示無飼養層之替代性貼附物質可維持豬胚幹細胞之分化多能性。（5）細胞凋亡分析：無飼養層之替代性貼附物質對豬胚幹細胞未發現具有增加細胞凋亡現象。本試驗以 laminin、collagen IV、fibronectin 及 MatrigelR 等飼養層替代性貼附物質進行豬胚幹細胞培養，配合以 ESM 添加 16% FBS 及 bFGF 1 ng/mL 之培養液，可獲得較佳之生長曲線、群落形成、未分化狀態與較低的細胞毒性，並能維持分化多能性與避免細胞凋亡等優點，此研究結果可作為未來豬胚幹細胞無飼養層培養系統之參考。
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