建立以小鼠乳腺腫瘤病毒基因啟動子啟動可誘導式基因表現DNA 載體系統並表現Mst4 基因
- 期別
- 2015-48-1-60-67
- 作者
- 趙俊炫
- 關鍵字
- 基因調控、小鼠乳腺腫瘤病毒基因啟動子、四環黴素可誘導系統
- 摘要
- 四環黴素可誘導系統(tetracycline inducible system) 是目前廣泛使用於調節基因表現的系統之一，當添加四環黴素時即可誘發基因表現；利用四環黴素可調節式基因表現系統需要兩組質體DNA，分別含有調節性DNA 片段及反應性DNA 片段。本研究利用已構築只需一個DNA 質體就可具有四環黴素可調節式基因表現(poMRTneo/GFP plasmid)，當轉殖入乳腺上皮細胞株後發現須同時添加四環黴素及醣質皮質素方能誘發表現，證明醣質皮質素確實會作用於MMTV 啟動子。之後將此質體應用到表現功能性基因上，以Mst4 蛋白質基?基因及其c 端刪除突變序列取代原有GFP 報導基因， 得到poMRTneo/HA-Mst4，poMRTneo/HA-Mst4△ 272，poMRTneo/HA-Mst4△ 297，poMRTneo/GFP-Mst4，poMRTneo/GFP-Mst4△ 272 and poMRTneo/GFP-Mst4△ 297 等質體DNA。當添加此四環黴素後展現高度誘發Mst4 表現，並且所表現的Mst4 蛋白質激?能正常分佈細胞胞器內。這些結果證明我們已經建構可應用於乳腺上皮細胞之可調節式基因專一表現系統。