冷凍保護劑與平衡時間對微滴玻璃化冷凍之山羊早期胚後續發育之影響
- 期別
- 2015-48-4-243-249
- 作者
- 王得吉、林信宏、康定傑、黃政齊
- 關鍵字
- 山羊、早期胚、微滴玻璃化冷凍、胚發育能力
- 摘要
- 本試驗目的是利用微滴玻璃化冷凍(micro-drop vitrification) 技術進行山羊早期胚冷凍保存之研究，增加冷凍早期胚解凍後之存活與後續發育之能力，以利將來人工生殖相關技術研發及種原保存工作。經產母羊經超級排卵(superovulation) 處理及配種後之第2 － 3 天，以外科手術自輸卵管回收早期胚進行玻璃化冷凍。試驗一以濃度16.5% EG 16.5% DMSO 冷凍保護劑進行不同發育階段早期胚微滴玻璃化冷凍。試驗二比較不同濃度冷凍保護劑進行8 細胞期胚之玻璃化冷凍。試驗三評估不同冷凍保護劑配方進行4 細胞期胚之玻璃化冷凍。試驗四探討第一階段不同平衡時間繼之以20.0% EG 20.0% DMSO 冷凍保護劑進行4 細胞期胚之玻璃化冷凍效果。試驗一之結果顯示，4 細胞期之山羊胚於解凍後無法繼續發育，而8 細胞期之山羊胚於解凍後發育至桑椹胚者為22.2%，16- 細胞期之山羊胚於解凍後發育至桑椹胚者為50.0%，而各細胞期之山羊胚均未發育至囊胚階段。於試驗二，利用16.5% EG 16.5% DMSO 進行8 細胞期山羊胚之玻璃化冷凍再解凍後，發育至桑椹胚為9.1%，但未發育至囊胚；利用20.0% EG 20.0% DMSO 進行8 細胞期山羊胚之玻璃化冷凍再解凍後，發育至桑椹胚為20.0%，而囊胚率為6.7%。於試驗三，利用20.0% EG 20.0% DMSO 進行早期胚之玻璃化冷凍再解凍後，發育至8 細胞期為26.1%，而囊胚率為4.3%；利用25.0% EG 25.0% glycerol 進行早期胚之玻璃化冷凍再解凍後，發育至8 細胞期為11.1%，並未發育至囊胚。於試驗四，利用20.0% EG 20.0% DMSO 進行早期胚之玻璃化冷凍前，於低濃度冷凍保護劑(10.0% EG 10.0% DMSO) 下平衡時間45 秒再解凍後，發育至8 細胞期為25.0%，而無囊胚發育；平衡時間若縮減為35 秒，其再解凍後發育至8 細胞期者為33.3%，而囊胚率為12.8%。證實預平衡時間為35 秒且繼之以20.0% EG 20.0% DMSO 冷凍保護液進行山羊早期胚微滴玻璃化冷凍保存，可成功發育至囊胚期。