細胞數、蛋白?處理與聚合對於 SRY/ZFX與 BE5引子進行性別鑑定的影響
- 期別
- 2004-037-4-0333-0341
- 作者
- 蕭振文、陳裕信、蔡麗卿、楊鎮榮、李善男、鄭登貴、薛佑玲、陳立人
- 關鍵字
- 牛胚、性別鑑定、引子、聚合?連鎖反應。
- 摘要
- 本研究之主要目的乃探討應用SRY/ZFX及BE5引子進行聚合?連鎖反應（polymerase chain reaction, PCR）性別鑑定時，細胞數、PCR之前蛋白? K (proteinase K) 處理與否，以及聚合?種類對於性別鑑定敏感性與特異性之影響，藉以提昇性別鑑定之準確性。試驗分別利用經過純化不同性別乳牛基因組DNA及體外培養之乳牛體細胞 (卵丘細胞) 做為性別鑑定之材料。結果顯示，經過純化之不同性別乳牛基因組 DNA樣品，SRY/ZFX及BE5二組引子之性別鑑定敏感性可達到5 ng，且不論一般Taq聚合?或於高溫條件始啟動聚合作用的 Hot Start 聚合?均可獲得專一性的PCR產物；而利用體外培養的乳牛體細胞進行分析時，細胞樣品至少需 10個以上，並於 PCR之前先經蛋白? K前處理，配合使用一般Taq或 Hot Start DNA聚合?進行 PCR，是適合的細胞樣品性別鑑定條件。